技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 电泳仪常见问题处理方法
电泳仪常见问题处理方法
更新时间:2023-08-09   点击次数:503次

注意事项
1、电泳中使用的溴化乙锭(EB)为中度毒性、强致癌性物质,务必小心,勿沾染于衣物、
皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作,戴一次性手套,并及时更换。
2、预先加入EB 时可能使 DNA 的运动速度下降15%左右,且不同构型的 DNA 的影响程度不同。所以为取得较真实的电泳结果可以在电泳结束后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶液浸泡染色。EB在光照下易降解,若凝胶放置一段时间后才观察,即使原来胶内或样品已加 EB,建议选择EB溶液浸泡染色。
3、加样进胶时不要形成气泡,需在凝胶液未凝固之前及时**,否则,需重新制胶。
4、电泳时溴酚兰在琼脂糖凝胶中的运动速度可以用于参考电泳速度,已实际电泳条带运动速度为准。
常见问题分析

常见问题

原因

对策

DNA条带模糊

DNA降解

实验过程避免核酸酶污染

电泳缓冲液陈旧

电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。TBE建议使用10次就更换缓冲液

所用电泳条件不合适

电泳时电压不应超过6V/CM,温度<30℃,巨大DNA链电泳,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液的缓冲能力,注意经常更换

DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量

DNA含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除多余盐分

有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白

DNA变性

电泳前勿加热,用TE缓冲液稀释DNA

出现片状拖带或涂抹带

PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往PCR体系需要优化,PCR程序需要摸索。

其对策有:调整PCR体系和PCR程序,摸索出合适的条件。

不规则DNA带迁移

电泳条件不合适

电泳时电压不应超过6V/CM,温度<30℃,巨大DNA链电泳,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液的缓冲能力,注意经常更换

DNA变性

电泳前勿加热,用TE缓冲液稀释DNA

带弱或无DNA带

DNA上样量不够

增加DNA上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度高,上样量可适当降低

DNA降解

实验过程避免核酸酶污染

DNA跑出凝胶

缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

EB染色的DNA,所用光源不合适

应用短波长(254nm)的紫外光源

DNA带缺失

DNA跑出凝胶

缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

分子大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间,核准正确凝胶浓度

DNA变性

电泳前勿加热,用20mM Nacl 缓冲液稀释DNA

DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适

在脉冲凝胶电泳上分析

电泳时Ladder扭曲

配胶的缓冲液和电泳缓冲液不是同时配置

同时配置,电泳缓冲液高出液面1-2mm即可

电泳时电压过高

电泳时电压不应超过6V/CM

上海旦鼎国际贸易有限公司

上海旦鼎国际贸易有限公司

地址:上海市金山区枫泾镇环东一路65弄3号2994室

主营产品:真空泵,离心机,液氮罐,制冰机,*声波清洗机,食品安全检测仪,磁力搅拌器,旋转蒸发仪,移液器

©2019 版权所有:上海旦鼎国际贸易有限公司  备案号:沪ICP备10210192号-3  总访问量:977317  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆